關於測抗原的競爭法 

 

ELISA試劑盒當抗原材料中的幹擾物質不易除去 ，或不易得到足夠的純化抗原時 ，可用此法檢測特異性抗體 。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合 。標本中抗體量越多 ，結合在固相上的酶標抗體愈少 ，因此陽性反應呈色淺於陰性反應 。如抗原為高純度的 ，可直接包被固相 。如抗原中會有幹擾物質 ，直接包被不易成功 ，可采用捕獲包被法 ，即先包被與固相抗原相應的抗體 ，然後加入抗原 ，形成固相抗原 。洗滌除去抗原中的雜質 ，然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應 。競爭法測抗體有多種模式 ，可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合 ，抗HBc ELISA一般采用此法 。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合 ，洗滌後再加入酶標抗體 ，與結合在固相上的抗原反應 。抗HBe的檢測一般采用此法 。
實驗步驟 
1.  以稀釋液將待檢標本做適當稀釋（預試中確定）加入包被有已知抗原的酶標板中（50ul/孔） ，加封口膠帶於37℃作用30min 。
2.  棄反應液 ，以衝洗液連續洗板5次並於吸水紙上拍幹 。
3.  加入酶標抗體（濃度在預試中確定） 。加封口膠帶後於37℃作用30min 。
4.  重複第2步 。
5.  加底物（濃度在預試中確定） ，加封口膠帶後於室溫下避光作用5-60 min ，其間不時觀察 ，顯色滿意後加終止液50ul/孔 。
6.  於酶標儀測定OD值 ，OPD用492nm測定 ，TMB用450nm測定 。
 

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