關於測抗原的競爭法
ELISA試劑盒當抗原材料中的幹擾物質不易除去
,或不易得到足夠的純化抗原時
,可用此法檢測特異性抗體。其原理為標本中的抗體和一定量的酶標抗體競爭與固相抗原結合
。標本中抗體量越多
,結合在固相上的酶標抗體愈少
,因此陽性反應呈色淺於陰性反應
。如抗原為高純度的
,可直接包被固相
。如抗原中會有幹擾物質
,直接包被不易成功
,可采用捕獲包被法
,即先包被與固相抗原相應的抗體
,然後加入抗原
,形成固相抗原
。洗滌除去抗原中的雜質
,然後再加標本和酶標抗體進行競爭結合反應。競爭法測抗體有多種模式
,可將標本和酶標抗體與固相抗原競爭結合
,抗HBc ELISA一般采用此法
。另一種模式為將標本與抗原一起加入到固相抗體中進行競爭結合
,洗滌後再加入酶標抗體
,與結合在固相上的抗原反應
。抗HBe的檢測一般采用此法
。
實驗步驟
1. 以稀釋液將待檢標本做適當稀釋(預試中確定)加入包被有已知抗原的酶標板中(50ul/孔)
,加封口膠帶於37℃作用30min
。
2. 棄反應液
,以衝洗液連續洗板5次並於吸水紙上拍幹
。
3. 加入酶標抗體(濃度在預試中確定)
。加封口膠帶後於37℃作用30min
。
4. 重複第2步
。
5. 加底物(濃度在預試中確定)
,加封口膠帶後於室溫下避光作用5-60 min
,其間不時觀察
,顯色滿意後加終止液50ul/孔
。
6. 於酶標儀測定OD值
,OPD用492nm測定
,TMB用450nm測定
。