試驗操作中影響結果的原因

elisa 試驗以靈敏度較高 、特異性較好的特點在臨床上得到了廣泛的應用 ，但操作中的各個環節對試驗的檢測效果影響較大 ，如不注意 ，有可能導致顯色不全 、花板等結果 。我將操作中各個環節常出現問題的原因及解決辦法總結於下 ，以期給同行帶來一些啟發 ，提高試驗質量 。

下麵分析Elisa試驗操作中可能影響結果的原因 ，並給出相應的解決辦法

1. 選擇試劑

選擇質量優良的檢測試劑 ，嚴格按照試劑說明書進行操作 ，操作前將試劑在室溫下平衡30-60分鍾 。

2 加樣

可能原因 ： ① 血清或血漿標本分離不好即進行加樣; ② 手工操作中 ，加樣板過多造成加樣後放入孵箱前等待時間過長(特別是室內溫度較高時); ③ 加完標本再加酶試劑時酶濺出孔外 。解決辦法 ： ① 標本為血清 ：將血液先自然存放1-2小時後 ，再用3000rmp離心15分鍾;標本為血漿 ：必須使用含抗凝劑的血液標本收集管 ，采血後必須立即顛倒混合5-10次 ，放置一段時間後 ，3000rpm離心15分鍾;若在幾天內檢測 ，可放在2-8℃冰箱中 ，若要貯存 ，則置於-20℃的低溫冰箱內 。 ② 加樣後及時放入孵箱 。 ③ 加酶試劑後用吸水紙在酶標板表麵輕拭吸幹 。④ 如果采用AT或其他全自動加樣 ，選擇FAME或其他後處理儀器加酶試劑 。 ⑤ 標本較多時 ，請分批操作 。

3. 孵育

可能原因 ： ① 孵育時未貼封片或加蓋 ，使標本或稀釋液蒸發 ，吸附於孔壁 ，難於清洗*; ② 孵育時間人為延長 ，導致非特異性結合緊附於反應孔周圍 ，難以清洗* 。解決辦法 ：① 貼封片或加蓋; ② 按說明步驟嚴格控製操作時間 。

4. 洗板

可能原因 ： ①采用手工洗板,孔與孔之間液體交叉 。 ② 采用半自動洗板機洗板時 ，洗液量不足 ，導致洗板不*;洗板針堵塞 ，抽吸不*;洗板不暢 ，導致洗板效果差 。 ③ 反應板過多造成洗板等待時間長 。 解決辦法 ： ① 保證洗液注滿各孔 ，洗板針暢通 ，洗完板後在吸水紙(選擇幹淨 、無或少塵的吸水材料)上輕輕拍幹; ② 合理安排 ，或多用幾台洗板機 。

5. 顯色

可能原因 ： ① 顯色劑配製後放置時間過長或使用過期顯色劑; ②加顯色劑時濺出孔外造成液體回流 。解決辦法 ： ① 顯色劑盡量在臨用前配製 ，堅持不用過期顯色劑 ，肉眼可見淺藍色的TMB顯色劑不用; ② 加樣時保持顯色劑不外流; ③ A 、B液應避免接觸金屬器械 。

6. 終止

可能原因如加終止液時產生較多氣泡 ，導致假陽性增加 。所以在加終止液時應避免產生氣泡 。

7. 讀板

如讀板時板底不清潔等 。應保證酶標板清潔 。

所以在整個操作過程中保證酶標板不接觸次氯酸;盡可能實現ELISA檢測標準自動化 ，有效提高檢測質量 。

在實際操作中 ，除了選擇優良試劑外 ，必須嚴格按照操作步驟進行操作 ，同時作好室內質控 、室間質評 ，以嚴謹的工作作風檢測每一份標本 ，才能保證檢測質量 。現在國內已有相當數量的單位擁有全自動酶標儀 ，這對於實現ELISA標準化檢測 、提高檢測質量起到了重要作用 。

上一篇 elisa試劑盒對結核病的感染測試 下一篇 ELISA試劑盒實驗幹擾因素