植物病毒病檢測方法
植物病毒病是農業上一種重要病害
，嚴重影響農作物的產量和質量, 目前還沒有1種治療效果較理想的藥劑
，對發病植株做到早期診斷及提前檢測就顯得尤為重要
。植物病毒學曆經近百年的發展
，植物病毒的檢測方法與手段也在不斷發展與改進
。常用的方法有侵染力測定法
、血清學方法
、電子顯微鏡計數和分子生物學法等
。
1.4.1侵染力測定法
侵染力測定法是將病毒樣本接種在植物上
，根據侵染力的大小定量
。它的靈敏度在所有定量法中是比較高的
，而且是其他定量法的基礎
。設計一種新的定量法
，如果不經過侵染力的驗證
，將無法判斷測定的是病毒或者是具有侵染力的病毒
。侵染力測定法包括局部枯斑法
、澱粉－碘斑法
、係統感染率的測定法等
。侵染力測定多用粗汁液來接種
，為了避免抑製物質的作用和使半葉枯斑數目控製在一定範圍
，須用緩衝液稀釋接種物
。
局部枯斑法 1929年F.O.Holmes發現TMV在心葉煙（Nicotiana glutinosa）接種葉片上引起局部壞死斑點
，在一定的病毒濃度範圍內
，所產生的斑點數目與病毒濃度成正比例。這一發現成為病毒侵染性定量測定的基礎（田波
，1987）
。所有機械傳染的病毒都有可能應用局部斑點法
，但實際上隻有少數病毒具有可用於定量測定的局部斑寄主
。一個待測樣品所形成的斑點數目除取決於接種物中病毒濃度外
，還受試驗植物種類
、環境條件和接種物中是否含抑製物質的影響。
澱粉－碘斑法 當所研究的病毒沒有過敏性枯斑寄主時
，采用此法
。Holmes（1931）發現TMV接種的煙葉上有時形成明顯的黃化斑塊
，但不能用於計數
。將這種接種葉用95％乙醇加熱到80℃固定
，然後用I2和KI混合液（10克I2
，30克KI，1500毫升H2O）染色時
，則侵染點處出現澱粉－碘的藍色反應
。當下午采摘葉片
，褪色過夜
，然後用碘液染色
，則侵染點較周圍組織著色淺
；當采摘葉片前
，植株先在黑暗中放幾個小時
，再用碘液染色
，則侵染點組織著色深
。這是由於病毒侵染既降低光合組織中碳水化合物的形成
，也降低碳水化合物從光合組織中的運出
。澱粉－碘染色的強弱受環境條件的影響較大
，不如局部枯斑法可靠
，但在標準化條件下仍可用於侵染性的定量測定
。
侵染性滴度法 當上述方法都不適用時
，可采用侵染性滴度法
。即把欲測定樣品用緩衝液稀釋
，可用十倍稀釋
、成倍稀釋
、半倍稀釋或更低稀釋
。這種方法的缺點是需用大量實驗植物
，但可得到較好的結果
。此方法可用於介體傳染的病毒
。
1.4.2血清學方法
血清學方法原理是利用抗原抗體的體外特異性結合檢測植物病毒
。主要包括沉澱反應
、凝聚反應
、酶聯免疫吸附試驗（ELISA）
、免疫電鏡（IEM）
、放射免疫測定（RIA）
、PCR（聚合酶蓮式反應）法等
。
沉澱反應 將可溶性抗原與相應的抗體混合
，當兩者的比例合適
，並有鹽類存在時
，即有沉澱物出現，叫做沉澱反應
。由於沉澱物主要是由抗體球蛋白所組成
，為了保證有足夠的抗體
，因此試驗時通常要稀釋抗原
，不稀釋抗體
。
凝聚反應 在微生物細胞懸液中
，加入含有特異性抗體的血清
，有一定濃度的電解質
，微生物細胞凝聚成團
，叫做凝聚反應
。分為直接凝聚反應與間接凝聚反應
。由於病毒是可溶性抗原
，必須把病毒的抗體先吸附於一種與免疫無關的顆粒表麵
，然後與相應的抗原結合反應
。用於吸附抗體的顆粒有皂土
、乳膠
、炭末
、紅細胞等
。