1. 血清 ：室溫血液自然凝固10-20分鍾 ，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分） 。仔細收集上清 ，保存過程中如出現沉澱 ，應再次離心 。

2. 血漿 ：應根據標本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑 ，混合10-20分鍾後 ，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分） 。仔細收集上清 ，保存過程中如有沉澱形成 ，應該再次離心 。

3. 尿液 ：用無菌管收集 ，離心20分鍾左右（2000-3000轉/分） 。仔細收集上清 ，保存過程中如有沉澱形成 ，應再次離心 。胸腹水、腦脊液參照實行 。

4. 細胞培養上清 ：檢測分泌性的成份時 ，用無菌管收集 。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分） 。仔細收集上清 。檢測細胞內的成份時 ，用PBS（PH7.2-7.4）稀釋細胞懸液 ，細胞濃度達到100萬/ml左右 。通過反複凍融 ，以使細胞破壞並放出細胞內成份 。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分） 。仔細收集上清 。保存過程中如有沉澱形成 ，應再次離心 。

5. 組織標本 ：切割標本後 ，稱取重量 。加入一定量的PBS ，PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存備用 。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度 。加入一定量的PBS（PH7.4） ，用手工或勻漿器將標本勻漿充分 。離心20分鍾左右（2000-3000轉/分） 。仔細收集上清 。分裝後一份待檢測 ，其餘冷凍備用 。

6. 標本采集後盡早進行提取 ，提取按相關文獻進行 ，提取後應盡快進行實驗 。若不能馬上進行試驗 ，可將標本放於-20℃保存 ，但應避免反複凍融.

7. 不能檢測含NaN3的樣品 ，因NaN3抑製辣根過氧化物酶的（HRP）活性 。

 

操作步驟 ：

標準品的稀釋與加樣 ：在酶標包被板上設標準品孔10孔 ，在* 、第二孔中分別加標準品100μl ，然後在* 、第二孔中加標準品稀釋液50μl ，混勻 ；然後從*孔 、第二孔中各取100μl分別加到第三孔和第四孔 ，再在第三 、第四孔分別加標準品稀釋液50μl ，混勻 ；然後在第三孔和第四孔中先各取50μl棄掉 ，再各取50μl分別加到第五 、第六孔中 ，再在第五 、第六孔中分別加標準品稀釋液50ul ，混勻；混勻後從第五 、第六孔中各取50μl分別加到第七 、第八孔中 ，再在第七 、第八孔中分別加標準品稀釋液50μl ，混勻後從第七 、第八孔中分別取50μl加到第九 、第十孔中 ，再在第九第十孔分別加標準品稀釋液50μl ，混勻後從第九第十孔中各取50μl棄掉 。（稀釋後各孔加樣量都為50μl ，濃度分別為60 mIU/ml ，40 mIU/ml  ，20 mIU/ml ，10 mIU/ml ， 5mIU/ml） 。
加樣 ：分別設空白孔（空白對照孔不加樣品及酶標試劑 ，其餘各步操作相同） 、待測樣品孔 。在酶標包被板上待測樣品孔中先加樣品稀釋液40μl ，然後再加待測樣品10μl（樣品zui終稀釋度為5倍） 。加樣將樣品加於酶標板孔底部 ，盡量不觸及孔壁 ，輕輕晃動混勻 。
溫育 ：用封板膜封板後置37℃溫育30分鍾 。
配液：將30（48T的20倍）倍濃縮洗滌液用蒸餾水30（48T的20倍）倍稀釋後備用 。
洗滌 ：小心揭掉封板膜 ，棄去液體 ，甩幹 ，每孔加滿洗滌液 ，靜置30秒後棄去 ，如此重複5次 ，拍幹 。
加酶 ：每孔加入酶標試劑50μl ，空白孔除外 。
溫育 ：操作同3 。
洗滌 ：操作同5 。
顯色 ：每孔先加入顯色劑A50μl ，再加入顯色劑B50μl ，輕輕震蕩混勻 ，37℃避光顯色15分鍾.
終止 ：每孔加終止液50μl ，終止反應（此時藍色立轉黃色） 。
測定 ：以空白空調零 ，450nm波長依序測量各孔的吸光度（OD值） 。 測定應在加終止液後15分鍾以內進行 。

 

注意事項 ：

試劑盒從冷藏環境中取出應在室溫平衡15-30分鍾後方可使用 ，酶標包被板開封後如未用完 ，板條應裝入密封袋中保存 。
濃洗滌液可能會有結晶析出 ，稀釋時可在水浴中加溫助溶 ，洗滌時不影響結果 。
各步加樣均應使用加樣器 ，並經常校對其準確性 ，以避免試驗誤差 。一次加樣時間控製在5分鍾內 ，如標本數量多 ，使用排槍加樣 。
請每次測定的同時做標準曲線 ，做複孔 。如標本中待測物質含量過高（樣本OD值大於標準品孔*孔的OD值） ，請先用樣品稀釋液稀釋一定倍數（n倍）後再測定 ，計算時請zui後乘以總稀釋倍數（×n×5） 。
封板膜隻限一次性使用，以避免交叉汙染 。
底物請避光保存 。
嚴格按照說明書的操作進行 ，試驗結果判定必須以酶標儀讀數為準.
所有樣品 ，洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理 。
本試劑不同批號組分不得混用 。

本試劑僅供研究使用       目的 ：本試劑盒用於測定小鼠血清 ，血漿及相關液體樣本中β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的活性 。

實驗原理 ：

本試劑盒應用雙抗體夾心法測定標本中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)水平 。用純化的小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗體包被微孔板 ，製成固相抗體 ，往包被單抗的微孔中加入β氨基己糖苷酶A(β-Hex A) ，再與HRP標記的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)抗體結合 ，形成抗體-抗原-酶標抗體複合物 ，經過*洗滌後加底物TMB顯色 。TMB在HRP酶的催化下轉化成藍色 ，並在酸的作用下轉化成zui終的黃色 。顏色的深淺和樣品中的β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)呈正相關 。用酶標儀在450nm波長下測定吸光度（OD值） ，通過標準曲線計算樣品中小鼠β氨基己糖苷酶A(β-Hex A)的濃度 。

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