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神经胶质瘤细胞；H4实验报告
点击次数 ：362 更新时间 ：2024-11-27
神经胶质瘤细胞 ；H4实验报告：
一 、分离与培养：
1、无菌条件下，取出1-3d 龄SD大鼠心房组织 ，然后用PBS将此组织块清洗2次，将成1mm3左右大小；
2、往组织块中加入4 mL酶消化液（0.1% 和0.1% I型胶原酶），混悬10s，置37℃条件下消化10min，之后用滴管吹打制成单细胞悬液 ，自然沉淀并收集上清 ，用含10% FBS培养基终止消化后4℃放置；
3 、剩下的组织再加入3～4mL酶消化液，混悬10s，置37℃消化10 min后 ，按上述方法收集上清并终止消化后4℃放置，重复此步骤2-3次，直至组织*被消化；
4 、用200目不锈钢筛网过滤细胞消化液 ，1200r/min 离心10min ，弃去上清，沉淀细胞用含有10％ FBS DMEM/F12培养基混悬，接种于25cm2培养瓶，放置于37℃ ，5％CO2 培养箱中培养；
5、差速贴壁1h后，吸出培养基 ，按实验需要接种于6孔板中继续培养 ；
二、免疫荧光鉴定：
1 、待心房肌细胞生长至80%融合时，弃去培养基，用温育的PBS冲洗细胞2次 ，每次10min，然后用4%多聚甲醛在室温条件下固定细胞15min ；
2 、PBS冲洗细胞2次 ，每次10min，然后在4℃条件下，用0.1％Triton X-100透膜15min；
3 、PBS冲洗细胞2次，每次10min，然后在室温条件下，用4% BSA封闭细胞30min ；
4、按1: 100的比例稀释α-actin一抗，然后将其放在4℃冰箱中孵育细胞过夜；
5、PBS冲洗细胞3次，每次10min ，按1：150的比例稀释抗α-actin的二抗 ， 37℃条件下放置1h ；
6 、用PBS冲洗3次，每次10min，在倒置荧光显微镜下观察图像并拍照。