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      兔病毒通用型(RHDV)PCR检测试剂盒使用方法:
      点击次数:871 更新时间 :2024-08-30

      使用方法 :

      测定法的灵敏度来自作为报告的酶。酶是一种有机催化剂,很少量的酶即可诱导大量的催化反应 ,产生可供观察的显色反应现象 。因此该体系常被称为酶放大体系 。

      1. 标准品的稀释:本试剂盒提供原倍标准品一支 ,用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。   24μg/ml    5号标准品    150μl的原倍标准品加入150μl标准品稀释液

       12μg/ml    4号标准品    150μl的5号标准品加入150μl标准品稀释液

       6μg/ml     3号标准品    150μl的4号标准品加入150μl标准品稀释液

       3μg/ml     2号标准品    150μl的3号标准品加入150μl标准品稀释液

       1.5μg/ml   1号标准品    150μl的2号标准品加入150μl标准品稀释液

      2. 加样:分别设空白孔、标准孔 、待测样品孔。在酶标包被板上标准品准确加样50μl,待测样品孔中先加样品稀释液40μl,然后再加待测样品10μl(样品终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部 ,尽量不触及孔壁,轻轻晃动混匀。

      3. 温育:用封板膜封板后置37℃温育30分钟 。   

      4. 配液:将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用

      5. 洗涤 :小心揭掉封板膜,弃去液体,甩干 ,每孔加满洗涤液,静置30秒后弃去,如此重复5次,拍干。

      6. 加酶:每孔加入酶标试剂50μl ,空白孔除外。

      7. 温育 :操作同3 。

      8. 洗涤 :操作同5。

      9. 显色:每孔先加入显色剂A50μl ,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀 ,37℃避光显色15分钟.

      10. 终止 :每孔加终止液50μl,终止反应(此时蓝色立转黄色)。

      11. 测定:以空白空调零,450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)。 测定应在加终止液后15分钟以内进行。

       

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