操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在*、第二孔中分别加标准品100μl，然后在*、第二孔中加标准品稀释液50μl ，混匀；然后从*孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl ，混匀 ；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别加到第五、第六孔中，再在第五 、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀 ；混匀后从第五、第六孔中各取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中分别取50μl加到第九、第十孔中 ，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂 ，其余各步操作相同） 、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl ，然后再加待测样品10μl（样品zui终稀释度为5倍）。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀 。
3. 温育 ：用封板膜封板后置37℃温育30分钟 。
4. 配液 ：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用。
5. 洗涤 ：小心揭掉封板膜 ，弃去液体 ，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。 6. 加酶 ：每孔加入酶标试剂50μl ，空白孔除外 。
7. 温育：操作同3 。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl ，再加入显色剂B50μl ，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl ，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值） 。 测定应在加终止液后15分钟以内进行 。