老哥俱乐部

操作步骤:

1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一
、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三
、第四孔分别加标准品稀释液50μl
，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉
，再各取50μl分别取50μl分别加到第七
、第八孔中
，再在第七
、第八孔中分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第七、第八孔中加到第五、第六孔中
，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul
，混匀
；混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九
、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。(稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L，120 ng/L ，60 ng/L
，30 ng/，15 ng/L)。
 

2. 加样
：分别设空白孔(空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同)、待测样品孔

。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl(样品最终稀释度为5倍)。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁
，轻轻晃动混匀
。
 

3. 温育
：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
 

4. 配液：将30(48T的20倍)倍浓缩洗涤液用蒸馏水30(48T的20倍)倍稀释后备用。
 

5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干
，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次
，拍干
。
 

6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl
，空白孔除外

。
 

7. 温育：操作同3。
 

8. 洗涤

：操作同5
。
 

9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
 

10. 终止
：每孔加终止液50μl，终止反应(此时蓝色立转黄色)。
 

11. 测定：以空白空调零
，450nm波长依序测量各孔的吸光度(OD值)
。 测定应在加终止液后15分钟
。