操作步骤：
1. 标准品的稀释与加样：在酶标包被板上设标准品孔10孔，在di一 、第二孔中分别加标准品100μl，然后在di一 、第二孔中加标准品稀释液50μl，混匀 ；然后从di一孔、第二孔中各取100μl分别加到第三孔和第四孔，再在第三、第四孔分别加标准品稀释液50μl，混匀；然后在第三孔和第四孔中先各取50μl弃掉，再各取50μl分别取50μl分别加到第七、第八孔中，再在第七、第八孔中分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第七、第八孔中加到第五 、第六孔中 ，再在第五、第六孔中分别加标准品稀释液50ul，混匀 ；混匀后从第五、第六孔中各分别取50μl加到第九、第十孔中，再在第九第十孔分别加标准品稀释液50μl ，混匀后从第九第十孔中各取50μl弃掉。（稀释后各孔加样量都为50μl，浓度分别为180 ng/L ，120 ng/L ，60 ng/L，30 ng/，15 ng/L）。
2. 加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、待测样品孔 。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍） 。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁 ，轻轻晃动混匀 。
3. 温育 ：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4. 配液：将30（48T的20倍）倍浓缩洗涤液用蒸馏水30（48T的20倍）倍稀释后备用 。
5. 洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干 ，每孔加满洗涤液 ，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6. 加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外 。
7. 温育：操作同3。
8. 洗涤：操作同5。
9. 显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10. 终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
11. 测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度（OD值）。 测定应在加终止液后15分钟。
磷酸化雄激素受体抗体
磷酸化A-Raf抗体
酰基鞘氨醇脱酰酶2抗体
脂肪细胞特异性粘附分子抗体
腺相关病毒5抗体
腺苷酸活化蛋白激酶γ3抗体
腺苷单磷酸活化蛋白激酶β2抗体
磷酸化细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体
细胞周期末期促进复合蛋白APC1抗体
磷酸化蛋白激酶B2抗体
磷酸化铁蛋白Fe65抗体
磷酸化铁蛋白Fe65抗体
磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
磷酸化APP淀粉样肽前体蛋白抗体
磷酸化活化复制因子2抗体
磷酸化活化复制因子2抗体