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Elisa試劑盒操作不當會出現哪些誤差 ?
點擊次數 :392 更新時間 :2022-05-28
  ELISA法具有靈敏度高 、特異性強 、重複性好的特點 ,並具有操作簡便 、無放射性危害的優點 ,因而多年來廣泛應用於血站和醫院的實驗室中 ,但在測定中常會出現一些誤差和問題 。老哥俱樂部通過幾年的實驗觀察 ,認為影響結果的因素有如下方麵 。
  1 Elisa試劑盒
  (1)抗原 、抗體活性對效價的影響 :主要是試劑中抗體(或抗原)的效價降低或失活 ,結果不易判斷 。再有ELISA法靈敏度高 ,對雜質的反應靈敏度也高 ,實驗中空白對照OD值偏高或假陽性 。
  (2)酶結合物濃度過高 ,也會導致OD值假性增高 。
  2 試驗儀器
  (1)加樣器是否經過校正 ,酶免測定血清用血量很少 ,如手工加樣器的性能不好,吸取樣品不精確 ,會使結果忽高忽低 。
  (2)每次洗板前 ,應檢查洗板機針孔有無堵塞 。
  3 操作
  (1)檢測前先將Elisa試劑盒從冰箱取出置室溫平衡20min後使用 ,試劑用完及時放回冰箱冷藏 ,以免造成試驗結果假性降低 。
  (2)加樣時注意勿觸及包被板底部 ,以免擦傷包被物使抗體(抗原)脫落而影響實驗結果的準確性 。
  (3)洗滌不充分 ,會使結果假性增高 ,過分洗滌呈假陰性 。
  (4)比色時應保持包被孔底部無異物 、無水汽 ,特別是冬季板從37℃水浴箱取出時 ,底部留有水汽 ,應將板底擦幹後進行比色 ,水汽或孔內氣泡也會使OD值升高 。
  (5)抗原與抗體反應達到*平衡 ,依賴於溫度與時間 。溫度高於45℃易引起失活及標記物脫落 ,溫度低於4℃ ,影響反應速度 。總之 ,由於ELISA實驗的影響因素較多,在實際工作中必須操作規範 、仔細 ,避免和排除各種因素的影響 ,使之得到準確可靠的檢驗結果 。
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