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小鼠腦腸肽elisa檢測試劑盒樣本實驗前準備
點擊次數 :521 更新時間 :2022-05-24

樣本實驗前準備 :

ELISA試劑盒液體樣本 :包括血清 、血漿 、尿液 、胸腹水 、腦脊液 、細胞培養上清等 。

(1)血清

室溫血液自然凝固10-20分鍾後 ,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分) 。仔細收集上清 。保存過程中如有沉澱形成 ,應再次離心 。

(2)血漿 :

應根據標本的要求選擇EDTA 、檸檬酸鈉或肝素作為抗凝劑 ,混合10-20分鍾後 ,離心20分鍾左右(2000-3000轉/分) 。仔細收集上清 。保存過程中如有沉澱形成 ,應再次離心 。

(3)尿液 :

用無菌管收集 。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分) 。仔細收集上清 。保存過程中如有沉澱形成 ,應再次離心 。胸腹水 、腦脊液參照此實行 。

(4)細胞培養上清 :

檢測分泌性的成份時 ,用無菌管收集 。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分) 。仔細收集上清 。

(5)培養細胞

檢測細胞內的成份時 ,用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細胞懸液 ,細胞濃度達到100萬/ml左右 。通過反複凍融或加入組織蛋白萃取試劑 ,以使細胞破壞並放出細胞內成份 。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分) 。仔細收集上清 。保存過程中如有沉澱形成 ,應再次離心 。

(6)組織標本

切割標本後 ,稱取重量 。加入一定量的PBS ,PH7.4 。用液氮迅速冷凍保存備用 。標本融化後仍然保持2-8℃的溫度 。加入一定量的PBS(PH7.4) ,或組織蛋白萃取試劑, 用手工或勻漿器將標本勻漿化 。離心20分鍾左右(2000-3000轉/分) 。仔細收集上清 。分裝後一份待檢測 ,其餘冷凍備用 。

結果計算與判斷


1. 所有OD值都應減除空白值後再行計算 。


2. 以標準品500 、250 、125 、62.5 、31.2 、15.6 、7.8 、0 ng/ml為橫坐標 ,OD值為縱坐標 ,在坐標紙上作圖 ,畫出標準曲線 。


3. 根據樣品OD值在該曲線圖上查出相應AMA含量 ,再乘上稀釋倍數即可 。


試劑盒性能


  1.   靈敏度 :最小的AMA 檢測濃度小於4ng/ml 。


2. 特異性 :可同時檢測重組或天然的小鼠AMA 。不與小鼠其它細胞因子有交叉反應 。


3. 重複性 :板內 、板見變異係數均小於11% 。


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