操作流程 :
(1)待測樣品孔中每孔加入待測樣品100μl ,每種樣品設3個平行孔 ;設兩個陰性對照孔 ,每孔加未處理組的細胞裂解液100μl ;另設一個空白對照孔 ,加入純細胞裂解液100μl 。
(2)酶標板置4℃ ,包被過夜 。
(3)洗板 :吸幹孔內反應液,用洗滌液過洗一遍(將洗滌液注滿板孔後 ,即甩去) ,之後將洗滌液注滿板孔 ,浸泡1-2分鍾 ,間歇搖動 。甩去孔內液體後在吸水紙上拍幹 。重複洗滌3-4次 。
(4)陰性對照孔每孔加入PBS 50μl ,樣品孔及空白孔每孔加入1:500稀釋的兔抗人AIF抗體工作液50μl 。
(5)酶標板置37℃培養箱的濕盒內 ,孵育60min 。
(6)洗板 ,同(4) 。
(7)每孔加1:5000稀釋的HRP-標記的山羊抗兔抗體工作液 100μl 。
(8)酶標板置37℃培養箱的濕盒內 ,孵育60min 。
(9)洗板 ,同(4) 。
(10)每孔加TMB顯色液 100μl ,輕輕混勻10s ,置37℃暗處反應15-20min 。
(11)每孔加100μl 2mol/L H2SO4終止反應 。
(12)分別測450nm 吸光值W1和630nm吸光值W2 ,最終測得的OD值為兩者之差(W1-W2) ,以減少由容器上的劃痕或指印等造成的光幹擾 。
(13)數據處理 :在得出標本(S)和陰性對照(N)的 OD值後 ,計算S/N值 。S/N≥2.1為陽性判定標準 。
含錨蛋白重複序列-細胞因子信號抑製物盒蛋白家族12抗體
鈉鉀ATP酶通道蛋白抗體
AGXT2L2蛋白抗體
β澱粉樣蛋白胞內結構域相關蛋白1抗體
錨蛋白重複及SAM結構域蛋白6抗體
二磷酸腺苷核糖基轉移酶3抗體
二磷酸腺苷核糖基轉移酶5抗體
腺苷單磷酸脫氨酶1抗體
紅細胞蛋白Ank1抗體
腺苷酸琥珀酸裂解酶抗體
α1B糖蛋白抗體
載脂蛋白B-mRNA編碼蛋白抗體
凋亡誘導因子3抗體
凋亡蛋白活性因子1相互作用蛋白抗體
凋亡誘導蛋白D抗體
酸性神經鞘磷脂酶抗體
腺嘌呤核苷酸轉運蛋白1抗體
ATP酶H+轉運溶酶體輔助蛋白2抗體
肝素結合蛋白/陽離子抗菌蛋白37/天青殺素抗體
核突觸蛋白抗體
β-肌動蛋白/β-Actin 抗體(內參抗體)
β澱粉樣肽1-42(C端)/β-Amyloid 1-42 (CT)抗體
β澱粉樣肽1-16/Aβ1-16抗體